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cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)

cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建

我們采用的是美國進口第三代慢病毒載體用于cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建（詳情請參見慢病毒載體信息），相比較而言，我們的載體具有更多的優(yōu)勢：

1、含多種組成型EF1a /MSCV /CMV/Ubc啟動子，保證cDNA穩(wěn)定高表達；

2、含T2A肽鏈、3 ΔLTR (ΔU3)、SV40多聚A加尾信號等多種優(yōu)化過的優(yōu)勢元件，保證慢病毒載體能夠效包裝成病毒顆粒，并且整合到細胞基因組之后，實現(xiàn)高安全性、低免疫原性、穩(wěn)定長效表達；

3、含多個MSC位點或LCS無連接酶克隆位點、多種報告基因及抗性基因，選擇更靈活；

4、使用無連接酶克隆載體能插入長達5Kb cDNA序列

5、載體信息具有可追溯性，每種載體都具有對應(yīng)的國外參考文獻及數(shù)據(jù)，便于文獻發(fā)表；

組成型啟動子：

啟動子	表達水平	應(yīng)用
CMV	高	常規(guī)用于絕大多數(shù)細胞系.像Hela細胞、HEK293細胞、HT1080細胞等
MCSV	高	造血干細胞、干細胞等
EF1	中	強啟動子，用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等
PGK	中	強啟動子，用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等
UbC	低	低和穩(wěn)定表達，用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等

多種優(yōu)勢元件：

3 ΔLTR (ΔU3)

3’ LTR區(qū)域刪除了U3，使其不再有啟動/增強活性，成為自滅活（self-inactivating, SIN）載體，即整合到細胞基因組后，不會產(chǎn)生新的子代病毒，也降低了對周圍基因的意外激活。

copGFP

綠色熒光報告基因，與常用的EGFP類似，但熒光更亮。

pUC起始點

使質(zhì)粒在 E.coli 中高密度拷貝并且保持穩(wěn)定。

RSV/5’LTR （RSV雜交啟動子-R/U5’長末端重復(fù)序列）

讓全長病毒在293前體細胞中高水平包裝和轉(zhuǎn)錄表達。

CMV/5’LTR （CMV雜交型啟動子-R/U5長末端重復(fù)序列）

使慢病毒載體保持高水平轉(zhuǎn)錄和高效轉(zhuǎn)錄出含病毒包裝必需功能元件（如Psi, RRE, and cPPT等)的轉(zhuǎn)錄本，當用病毒包裝細胞系（如HEK 293細胞）包裝病毒時也能表達病毒衣殼蛋白。

SV40起始點

使質(zhì)粒在哺乳動物細胞中穩(wěn)定復(fù)制。

SV40多聚A加尾信號

強制轉(zhuǎn)錄終止子，有效終止轉(zhuǎn)錄或者終止共轉(zhuǎn)錄過程，維持穩(wěn)定態(tài)mRNA高水平表達。

LCS無連接酶克隆位點

不依賴多克隆位點，能將各種目的cDNA插入載體，不需要DNA鏈接酶，較常規(guī)方法可靠。

Kozak序列

優(yōu)化轉(zhuǎn)錄啟動與翻譯效率。

HA標簽

目標蛋白識別與純化。

WPRE元件

增強CMV啟動轉(zhuǎn)錄的穩(wěn)定性。

說明：每種載體用的優(yōu)勢元件均有所不同

客制化服務(wù)方案：

目前我們能夠為客戶提供包括cDNA釣取、慢病毒載體構(gòu)建、測序、慢病毒生產(chǎn)等一站式服務(wù)。我們的服務(wù)將為客戶最大限度地提高效率和節(jié)省時間，另外，我們的技術(shù)專家將為您的實驗提供全程支持，如有疑問，請Email至[email protected].cn。

我們可為客戶提供cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)的個性化定制服務(wù)方案，包括根據(jù)目的基因特征、目的細胞特征與客戶需求，我們會為客戶選擇最合適的慢病毒載體、啟動子、熒光標記或選擇性抗性標記，插入目的基因使其過表達，客戶也可以根據(jù)我們的載體信息自行挑選；同時又可以根據(jù)客戶的需要，可在重組慢病毒載體中加入各種報告基因或標簽（或進行改造），從而構(gòu)建cDNA過表達慢病毒載體。

雖然我們有標準的客制化服務(wù)流程，同時我們也會根據(jù)客戶需求，為每個客戶度身定制各種cDNA慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)方案。如有需要，歡迎致電021-34512321咨詢。

標準客制化服務(wù)流程：

cDNA過表達載體構(gòu)建服務(wù)列表：

我們可以根據(jù)客戶需求構(gòu)建各種濃度的超純純化cDNA過表達慢病毒載體，載體能被包裝成cDNA過表達慢病毒顆粒；無內(nèi)源性多聚A信號；對靶細胞無毒；從5 to 3 LTR序列大小大于8kb；采用無連接酶克隆系統(tǒng)，插入目的cDNA序列最大達5kb；可直接轉(zhuǎn)染細胞，用于瞬時轉(zhuǎn)染；也可以包裝成病毒顆粒感染細胞，用于穩(wěn)定長效表達。

超純純化標準：

內(nèi)毒素<10EU/mg質(zhì)粒DNA

RNA<0.2ug/mg

基因組DNA<2ug/mg

蛋白<3ug/mg

編號	cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建	標準	工作日
C200001	10 μg	超純純化	10
C200002	20 μg	超純純化	10
C200003	40 μg	超純純化	10

成功案例：

參考文獻：

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